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请教一个问题
Apollo
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发表于 2002-6-9 13:31
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请教一个问题
如何克隆Leptin(一种减肥蛋白)的基因?步骤。
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顺其自然,无为无不为; 行胜于言,无言无不言。
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发表于 2002-6-10 12:16
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[无标题]
以知序列的话,用pcr,未知的话,先根据蛋白序列,粗测mRNA,倒出CDNA(毕竟有几个碱基互补),以它为探针进行原位杂交,提出基因序列,然后剩下的你就会了,
尽管现在是黑暗的,但我 一步 一步 一步 走向光明 --------------------我外甥
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发表于 2002-6-10 19:51
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先蛋白序列->到PDB(Protein data bank)中查询,看是否有100%同源的蛋白质,如果有了,看别人是否已经克隆了,如果没有,肯定可以找到一些同源的序列->选择几个特异性序列(没有和其同源的序列),根据密码子合成相应的寡核甘酸序列(所有的情况)->以此为探针,和cDNA文库杂交,旧可以克隆起基因。
这是一个普遍路线,不同情况可能有所不同。
Let\'s look for the joy in our life!
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发表于 2002-6-21 22:29
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自卑
为什么你们什么都知道,我什么都不知道,呜呜呜。。。。。。
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发表于 2002-6-22 11:12
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用噬菌体展示技术真的很不错!
其实用这种方法也可以克隆到该基因,方法是很妙的!我这几天才看懂。
不过好像还得作出这种蛋白质的抗体,以便对与噬菌体外壳蛋白融合的目标蛋白结合,从而筛选出含有目标基因的噬菌体。有没有别的有效方法?
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